Studio della variabilità naturale del gene FAD7 in Olea Europaea

Due sequenze EST in olivo, codificanti per due isoforme della ?-3 desaturasi, sono state identificate in banche dati e sottoposte a multi-allineamento, sia a livello nucleotidico che a livello amminoacidico, con numerose sequenze codificanti desaturasi in diverse specie vegetali. Questa analisi ha evidenziato un elevato livello di similarità e conservazione delle sequenze in esame. In particolare, mediante il confronto con due particolari tipi di desaturasi, le FAD3 e le FAD7, è stato possibile discriminare la sequenza EST di olivo codificante l"isoforma citosolica (FAD3) da quella codificante l"isoforma plastidiale (FAD7), che è stata dunque oggetto di studio. Otto varietà di olivo (Leccino, Frantoio, Coratina, Sant"Agostino, Pasola, Toscanina, Ascolana Tenera, Ogliastro), opportunamente selezionate in base alla loro composizione in acidi linoleico e linolenico, sono state impiegate per valutare la variabilità genetica naturale di due regioni del gene fad7. Una predizione bioinformatica della struttura del gene ha consentito di identificarne due frammenti molto conservati e due più variabili, scelti per le analisi molecolari. Il sequenziamento diretto dei prodotti di PCR corrispondenti a tali regioni ha permesso di rilevare otto polimorfismi naturali nei frammenti meno conservati e nessuno nella regione più conservata, considerando come riferimento la sequenza della cultivar Leccino. Sono stati identificati otto polimorfismi SNP (Single Nucleotide Polymorphism), e tra questi due erano presenti in condizione di omozigosi, ma nessuno di questi polimorfismi comportava un significativo cambiamento strutturale o funzionale della proteina, confermando i risultati dell"analisi comparativa in silico riguardo all"elevato livello di conservazione della proteina FAD7. Le differenze nel contenuto di acido linolenico per le cultivar analizzate potrebbero quindi essere causate da meccanismi trascrizionali o posttrascrizionali.