Messa a punto di un metodo per l'individuazione di ?-1,3- glucanasi e chitinasi attraverso Native PAGE su estratti di piante di Prunus avium L. inoculate con Phytophthora sp.

Utilizzando la native PAGE (poliacrilamide gel elettroforesi) è stata rilevata la presenza di glucanasi e chitinasi su estratti di piantedi alcuni cloni di ciliegio selvatico Prunus avium L. inoculate con differenti specie di Phytophthora spp.. Il ciliegio da legno risulta infatti suscettibile a questo patogeno che provoca un indebolimento generale della pianta fino a determinarne la morte. Queste due PR (pathogenesis related) proteins normalmente sono prodotte dalla pianta come prima risposta di resistenza al patogeno. In particolare la loro attività enzimatica è coinvolta nella degradazione della parete e nella inibizione della crescita ifale del fungo. Generalmente le tecniche impiegate per la loro visualizzazione consistono nella colorazione dell'estratto cellulare grezzo o del gel di poliacrilamide attraverso procedure piuttosto lunghe e dispendiose nella quantita di reagenti e nella manodopera. In questo lavoro è stata invece utilizzata una tecnica diretta di colorazione dell'attività enzimatica su substrato di Carboximetil (cm)-Curdlan RBB (Remazol Brilliant Blu) per la glucanasi e su substrato di Glicol Chitosan per la chitinasi. Il protocollo utilizzato è risultato sensibile nell'individuare la presenza delle due proteine oltre che molto semplice, agevole nelle procedure e poco costoso.