Sviluppo di metodologie HPLC-ESI-MS per l identificazione, caratterizzazione e dosaggio di metaboliti secondari di cellule vegetali

Lo studio ha permesso di sviluppare metodologie analitiche che utilizzano la cromatografia liquida ad elevate prestazioni (HPLC), accoppiata alla spettrometria di massa (MS), con cui eseguire la simultanea separazione e identificazione di acidi fenolici, flavonoidi, catechine, antociani e stilbeni in estratti vegetali, non sottoposti a specifiche tecniche di pre-trattamento del campione. Le metodologie sviluppate si avvalgono della HPLC a fasi inverse con impiego di colonne di diametro interno di 2,0 mm (microbore), accoppiata in linea alla spettrometria di massa con sorgente di ioni per elettronebulizzazione (ESI) o per ionizzazione chimica a pressione atmosferica (APCI). Tale scelta è stata motivata dall’elevato potere risolutivo della RP-HPLC e dalla possibilità di rendere facilmente compatibile flusso e composizione della fase mobile con i metodi di ionizzazione sopra accennati per l’accoppiamento in linea dell’HPLC con lo spettrometro di massa, posto in successione con un rivelatore a serie di fotodiodi. Questo è stato utilizzato per acquisire, oltre allo spettro di massa, anche lo spettro di assorbimento nel campo delle lunghezze d’onda UV e visibile, caratteristico per le diverse classi di metboliti presi in considerazione. I metodi sviluppati si contraddistinguono per la semplicità e velocità d’esecuzione, il limitato trattamento pre-analisi dei campioni, la possibilità di eseguire simultaneamente analisi di composti appartenenti a diverse classi di metaboliti.